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Reinigung, biochemische und biophysikalische Charakterisierung einer sauren α-Galactosidase aus den Samen von Annona squamosa (Puddingapfel)

Reinigung, biochemische und biophysikalische Charakterisierung einer sauren α-Galactosidase aus den Samen von Annona squamosa (Puddingapfel)

 

Alpha-Galactosidase ist eine Exoglycosidase, die α-D-Galactose spaltet und zahlreiche Anwendungen in der Medizin-, Biotechnologie-, Lebensmittel- und Pharmaindustrie hat. In dieser Studie wurde eine niedermolekulare saure α-Galactosidase aus den Samen von Puddingapfel identifiziert. Die Reinigung von α-Galactosidase aus dem Rohextrakt entfetteter Samen wurde unter Verwendung von Ammoniumsulfatfraktionierung, hydrophober Wechselwirkung und Gelfiltrationschromatographietechniken erreicht. Die gereinigte Puddingapfel-α-Galactosidase (CaG) wanderte als einzelne Bande in nativer PAGE entsprechend einem Molekulargewicht von ~ 67 kDa und gespaltenen chromogenen, fluorogenen und natürlichen Substraten.

Es wurde gefunden, dass CaG ein Heterodimer mit Untereinheitenmassen von 40 und 30 kDa ist. Die kinetischen Parameter wie KM und Vmax betrugen mit p-Nitrophenyl-α-D-galactopyranosid 0,67 mM bzw. 1,5 U / mg. Galactose, Methyl-α-D-Galactopyranosid und D-Galacturonsäure hemmten die CaG-Aktivität im gemischten Modus. Die CD-Spektralanalyse im fernen UV-Bereich zeigte, dass gereinigtes CaG in seiner Sekundärstruktur überwiegend als Helix (35%), Beta-Faltblätter (16,3%) und Zufallsspulen (32,3%) vorliegt. Diese biochemischen und biophysikalischen Eigenschaften von CaG führen zum Verständnis seiner Primärsequenz und seiner Glykanstrukturen, die schließlich seine neuartigen physiologischen Rollen in Pflanzen und potenziellen industriellen Anwendungen definieren werden.

In diesem Artikel wird der Einfluss von Faktoren auf die Produktinnovation untersucht, die auf der Transformation und Nutzung von Wissen aus den organisationsinternen Beziehungen eines Unternehmens beruhen. Insbesondere analysiert dieses Papier den Einfluss des intraorganisatorischen Sozialkapitals (SC) (d. H. Bestehend aus strukturellen, relationalen und kognitiven Dimensionen) auf die realisierte Absorptionskapazität (RACAP). Darüber hinaus wird die Vermittlerrolle von RACAP in Bezug auf die Beziehung zwischen internem SC und Produktinnovation analysiert. Basierend auf einer Stichprobe von Unternehmen aus der spanischen biotechnologischen und pharmazeutischen Industrie wurden zwei Hypothesen unter Verwendung eines Strukturgleichungsmodells und der PLS-Technik (Partial Least Squares) getestet.

Die Ergebnisse stützen beide Hypothesen, was darauf hindeutet, dass die Entwicklung starker und enger Verbindungen, die auf einem gemeinsamen Verständnis und Vertrauen der Unternehmensmitglieder beruhen, das Unternehmen dazu veranlasst, dynamische Fähigkeiten zur Transformation und Nutzung von extern erworbenem Wissen zu entwickeln, was Innovationen auf der Grundlage der Entwicklung neuer Produkte fördert. Forschungsgrenzen, Implikationen und zukünftige Forschung werden auch von den Autoren des Papiers diskutiert.

 

Intensive Bitterkeit von Molekülen: Maschinelles Lernen zur Beschleunigung der Wirkstoffentdeckung

Die Arzneimittelentwicklung ist ein langer, teurer und mehrstufiger Prozess, der darauf abzielt, sichere Arzneimittel mit hoher Wirksamkeit zu erzielen. Eine entscheidende Voraussetzung für den Abschluss des Medikationsschemas für orale Medikamente, insbesondere für pädiatrische und geriatrische Bevölkerungsgruppen, ist das Erreichen eines Geschmacks, der die Compliance nicht behindert. Derzeit wird der aversive Geschmack von Arzneimitteln in späten Stadien klinischer Studien getestet. Dies kann zu einer Neuformulierung führen, die möglicherweise dazu führt, dass mehr Tiere für zusätzliche Toxizitätsversuche verwendet werden, die finanziellen Kosten steigen und die Markteinführung verzögert wird.

Hier präsentieren wir BitterIntense, ein Werkzeug für maschinelles Lernen, das Moleküle aufgrund ihrer chemischen Struktur in “sehr bitter” oder “nicht sehr bitter” klassifiziert. Das Modell, das auf chemisch verschiedenen Verbindungen trainiert wurde, weist bei mehreren Testsätzen eine Genauigkeit von über 80% auf. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass etwa 25% der Arzneimittel als sehr bitter vorhergesagt werden, wobei die Prävalenz (~ 40%) bei COVID19-Arzneimittelkandidaten und bei mikrobiellen Naturstoffen noch höher ist. Es wird vorausgesagt, dass nur ~ 10% der toxischen Moleküle stark bitter sind, und es wird auch vermutet, dass intensive Bitterkeit nicht mit der Hepatotoxizität von Arzneimitteln korreliert.

Sehr bittere Verbindungen können jedoch kardiotoxischer sein als nicht sehr bittere Verbindungen, die signifikant niedrigere QPlogHERG-Werte besitzen. BitterIntense ermöglicht eine schnelle und einfache Vorhersage der starken Bitterkeit von Verbindungen, die für die Lebensmittel-, Pharma- und Biotechnologieindustrie von Interesse sind. Wir schätzen, dass die Implementierung von BitterIntense oder ähnlichen Tools zu Beginn des Arzneimittelentdeckungsprozesses zu einer Verringerung der Verzögerungen, des Tiergebrauchs und der finanziellen Gesamtbelastung führen kann.

Reinigung, biochemische und biophysikalische Charakterisierung einer sauren α-Galactosidase aus den Samen von Annona squamosa (Puddingapfel)

Empfehlungen zur Straffung und Standardisierung der Machbarkeitsbewertungen für Standorte für klinische Studien: Eine ASCO-Forschungserklärung

Machbarkeitsbewertungen (FAs) sind wichtig, um die Standortfähigkeiten für die Durchführung klinischer Studien und ihre Eignung für bestimmte Studien zu ermitteln. Derzeitige FA-Methoden, die von Sponsoren von Biotechnologie- und Pharmaversuchen (Biotech-Pharma) und Auftragsforschungsorganisationen (CROs) verwendet werden, sind jedoch kostspielig, ineffizient, unnötig belastend und ressourcenintensiv. Diese Methoden verzögern den Start der Studie, wirken als Hindernis für die Teilnahme am Standort und verringern letztendlich den rechtzeitigen Zugang der Patienten zu klinischen Studien und neuartigen Behandlungen.
Methoden: Eine ASCO-Task Force wurde einberufen, um die spezifischen Belastungen und Herausforderungen der FA zu bewerten und Empfehlungen zur Verbesserung ihrer Effizienz und Effektivität zu entwickeln. Stakeholder (einschließlich Versuchsstandorte, Biotech-Pharma-Sponsoren und CROs) gaben Einblicke in Herausforderungen und boten Lösungen durch zwei Umfragen und ein persönliches Treffen an.

Die Task Force nutzte das Feedback, um Konsensempfehlungen zur Verbesserung der FAs für klinische Studien in der Onkologie zu formulieren.
Ergebnisse: Drei wichtige Empfehlungen wurden für die Anwendung in allen von Biotech-Pharma gesponserten Studien ermittelt: (1) Implementierung eines optimierten und einheitlichen FA-Prozesses in allen Studien und Sponsoren; (2) Fragen minimieren und standardisieren; und (3) Nutzung von Technologie zur Zentralisierung von FAs, Erleichterung der Kommunikation und Reduzierung von Redundanzen.
Schlussfolgerung: Es ist dringend erforderlich, den derzeitigen FA-Prozess zu verbessern, der kostspielig, inkonsistent, ineffizient, arbeitsintensiv und von ungewisser Wirksamkeit ist.

 

European Cuscuta TaqProbe qPCR. 50 RXN

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Incu-Mixer MP2™ Heated Plate Vortexer 115-240V European plug)

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Vornado™ miniature vortexer, grey cup head, 100 to 240V with European Plug

BV101-E 1 PC
EUR 229.09

OPCA04190-100UG - Tropomyosin Recombinant Protein (European house dust mite)

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Orbi-Shaker™Jr with rubber mat platform (9.5"x8"), 100-240V (European 2 prong plug)

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TBEV (European subtype, strain Neudoerfl) Envelope protein E, His Tag (HPLC verified)

ENE-T52H4 500ug
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Description: TBEV (European subtype, strain Neudoerfl) Envelope protein E, His Tag (ENE-T52H4) is expressed from human 293 cells (HEK293). It contains AA Thr 118 - Lys 675 (Accession # P14336).

STREPTAVIDIN: Texas Red Reagent

GWB-Q00343 1 mg Ask for price

BenchWaver™ 3D Rocker with flat mat, 13.5x13" platform, 100-240V (European 2 prong plug)

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OPCA04322-100UG 100ug
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OPCA04322-20UG 20ug
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OPCA04322-500UG - Major pollen allergen Aln g 1 Recombinant Protein (European alder)

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Recombinant Tick-borne encephalitis virus European subtype Genome polyprotein, partial

CSB-EP318509TEM 11863 mg Ask for price

Orbi-Shaker™ MP with 4 position micro plate platform, 100-240V (European 2 prong plug)

BT1502-E 1 PC
EUR 1168.82

Vornado™ miniature vortex mixer with blue cup head, 100 to 240V with European Plug Adapter

BV101-B-E 1 PC
EUR 229.09

Vornado™ miniature vortex mixer with green cup head, 100 to 240V with European Plug Adapter

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Vornado™ miniature vortex mixer with purple cup head, 100 to 240V with European Plug Adapter

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EUR 229.09

Congo Red

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09403-02 25G
EUR 39.9

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EUR 144

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EUR 265

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EUR 90
Description: VGlut inhibitor/dye for amyloidosis,amyloid in the cell walls of plants and fungi,outer membrane of Gram-negative bacteria

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B7766-5.1 10mM (in 1mL DMSO)
EUR 66
Description: VGlut inhibitor/dye for amyloidosis,amyloid in the cell walls of plants and fungi,outer membrane of Gram-negative bacteria

Congo Red

B7766-50 50 mg
EUR 154.8

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B7766-500 500mg
EUR 60
Description: VGlut inhibitor/dye for amyloidosis,amyloid in the cell walls of plants and fungi,outer membrane of Gram-negative bacteria

Congo Red

T14996-10mg 10mg Ask for price
Description: Congo Red

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EUR 159.6

MyFuge™12 Plus Digital Mini Centrifuge with combination rotor 100-240V (European 2 prong plug)

C2212-E each
EUR 649
Description: - COMBI-Rotor for tubes and strips- Digital control up to 7,000 rpm / 2,739 xg!- Twice the capacity of traditional mini centrifuges- Near silent operation- Timer up to 99 mins.The unique rotor design of the new MyFuge 12 Plus eliminates the need to switch rotors (or use a separate centrifuge) when changing between microtubes and PCR strips. The included, COMBI-Rotor allows for simultaneous centrifugation of up to 12 microtubes and/or 4 PCR strips.In addition, the MyFuge 12 Plus features a large digital display with adjustable speed (up to 7,000 rpm) and a digital timer. With built in rcf conversion, speed can be set/displayed in rpm or rcf.The MyFuge 12 Plus combines power with intuitive functionality making it the perfect companion in any laboratory.

EP Reagent Ruthenium Red Sol. - 100ML

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EUR 145.8

OPCA04311-1MG - Major pollen allergen Car b 1 isoform 2 Recombinant Protein (European hornbeam)

OPCA04311-1MG 1mg
EUR 2368

StripSpin™12D Digital Mini Centrifuge, holds 12 position PCR strips, 100-240V (European 2 prong plug)

C2248-E each
EUR 595
Description: - Unique rotor accepts 12-position PCR strips- Digital control up to 5,500 rpm- “Mini” sized, less than 8 inches wide- Timer up to 99 mins.The new StripSpin 12D digital mini centrifuge from Benchmark is uniquely designed for centrifugation of 12 position PCR strips. It features digital speed control up to 5,500 rpm, timer control up to 99 min., and a safety interlock to stop the centrifuge if the lid is opened during operation.With built in rcf conversion, speed can be set/displayed in rpm or rcf, the StripSpin 12D is the perfect solution for centrifugation of up to 4 x 12-position high efficiency PCR strips (or 48 x 0.2ml tubes) and includes a 2 year warranty.

OPCA04311-100UG - Major pollen allergen Car b 1 isoform 2 Recombinant Protein (European hornbeam)

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ViPrimePLUS Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus - European Genotype RT-qPCR Kit, 1

QV5004 each Ask for price

EP Reagent Phenol Red Sol. R2 - 500ML

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EUR 112.05

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MyFuge™ 5D Digital MicroCentrifuge with combination rotor, 4 x 5ml & 4 x 1.5/2.0ml, 100-240V (European 2 prong plug)

C2205-E each
EUR 595
Description: Includes rotor for all common centrifuge tubes up to 5ml'- Digital control up to 5,500 rpm / 1,690 xg- Conserves valuable bench space- Includes adapters for common blood tubes (12 x 75 mm)- Timer up to 99 mins.The myFuge™ 5D digital mini centrifuge includes a four position rotor that accepts a variety of 5ml tubes (including 5ml snap-cap and screw-cap centrifuge tubes, as well as 5ml blood collection tubes). In addition, the rotor has four positions for positions for standard microtubes (1.5/2.0ml) and offers optional adapters for 2ml cryotubes, 0.2ml PCR tubes, and 0.5ml microtubes, making it one of the most versatile and compact centrifuges in its class.The myFuge 5D offers digital speed control (up to 5,500 rpm). Timer is also controlled (up to 99 min.) with a safety interlock to stop the centrifuge if the lid is opened during operation. With built in rcf conversion, speed can be set/displayed in rpm or rcf. The myFuge 5D also comes with a 2-year warranty.

Congo Red 1%

40340025-1 8 oz
EUR 31.11

Congo Red (90%)

C685050 10g
EUR 51
Description: 573-58-0

CP Reagent Coloration Primary Solution Red - 100ML

CPPR01 100ML
EUR 232.2

EP Reagent Indicator Sol. Methyl Red 0.02% - 100ML

1055102 100ML
EUR 59.4

Congo Red Powder

abx090680-5g 5 g
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Congo Red Powder

abx090680-100l 100 µl
EUR 137.5

Congo Red Powder

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Congo Red Powder

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Congo Red Solution

CRA030 30 ml
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Congo Red Solution

CRA500 500 ml
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Congo Red Solution

CRA999 1000 ml
EUR 74.58

Congo Red (C.I. 22120)

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Congo Red (C.I. 22120)

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Congo Red (C.I. 22120)

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Congo Red (C.I. 22120)

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Congo Red (C.I. 22120)

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Congo Red (C.I. 22120)

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EUR 14.01
Description: Congo red, Certified

Congo red, Certified

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Sterile Pharmacol

PW1148F-1X100NO 1 unit
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Description: Sterile Pharmacol

ERYTHROLYSE RED BLOOD CELL LYSING BUFFER (10x) Reagent

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ERYTHROLYSE RED BLOOD CELL LYSING BUFFER (10x) Reagent

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Congo Red C.I. No. 22120

C25090 25G
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EP Reagent Biuret Reagent - 100ML

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RRSP3366-D 500ml
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EUR 27.3

EP Reagent Iodoplatinate Reagent - 200ML

1046300 200ML
EUR 502.2

Congo red, Practical grade

GRM927-100G 1 unit
EUR 6.93
Description: Congo red, Practical grade

Congo red, Practical grade

GRM927-25G 1 unit
EUR 6.93
Description: Congo red, Practical grade

EP Reagent Molybdovanadic Reagent - 100ML

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EP Reagent Methoxyphenylacetic Reagent - 100ML

1053601 100ML
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EP Reagent Bromocresol Green - Methyl Red Mixed Indicator - 1L

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EUR 296.7

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10126025 5L
EUR 457.65

EP Reagent Phosphomolybdotungstic Reagent - 100ML

1065000 100ML
EUR 226.8

EP Reagent Bromocresol Green Methyl Red Mixed Indicator - 100ML

1012602 100ML
EUR 59.4

AVIDIN/BIOTIN BLOCKING REAGENT Reagent

GWB-Q00289 30 ml Ask for price

Gordon-McLeod Reagent (Oxidase reagent)

R026-100ML 1 unit
EUR 7.76
Description: Gordon-McLeod Reagent (Oxidase reagent)

Sterile Pharmacol For collection of var

PW1148-1X100NO 1 unit
EUR 20.73
Description: Sterile Pharmacol For collection of var

Sterile Pharmacol For collection of var

PW1148-1X500NO 1 unit
EUR 90.38
Description: Sterile Pharmacol For collection of var

Sterile Pharmacol For collection of var

PW1148-5X100NO 1 unit
EUR 93.21
Description: Sterile Pharmacol For collection of var

Congo red, C.I. 22120, certified (Direct red 28)

02736-25 25g
EUR 134
Description: 573-58-0

EP Reagent Sulfomolybdic Reagent R3 - 1L

1086500 1L
EUR 398.25

FD Congo Red Solution™

PS108 500 ml
EUR 284.4

Congo Red Indicator 0.1% - 1L

COR01001 1L
EUR 339.29

USP Sol. Congo Red TS - 100ML

USP1901 100ML
EUR 80.78

USP Sol. Congo Red TS - 500ML

USP1905 500ML
EUR 133.66

Amyloid Stain Kit (Congo Red)

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Congo Red "high purity grade"

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EUR 149
Description: N/A

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80028-1 EA
EUR 149

Amyloid Stain Kit (Congo Red)

AMY-1 1 kit(s)
EUR 92.57

Amyloid Stain Kit (Congo Red)

AMY-2 1 kit(s)
EUR 47.58

Congo Red Indicator 0.1% - 500ML

COR01005 500ML
EUR 101.35

Congo Red Indicator 1% - 500ML

COR1005 500ML
EUR 124.85

NovaUltra Congo Red Stain Kit

IW-3002 -
EUR 225

Congo red (1% aqueous)Solution

S067-125ML 1 unit
EUR 6.48
Description: Congo red (1% aqueous)Solution

Congo red (1% aqueous)Solution

S067-500ML 1 unit
EUR 26.07
Description: Congo red (1% aqueous)Solution

N.N.C.D.-reagent

N632003 1g
EUR 1200
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MTS Reagent

2808-1000 each
EUR 1188

MTS Reagent

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EUR 438

MTT Reagent

2809-1G each
EUR 216

Alle Beteiligten können von der Umsetzung dieser Empfehlungen profitieren, die darauf abzielen, die Belastungen zu minimieren und sicherzustellen, dass mehr Studienorte und Patienten rechtzeitig Zugang zu klinischen Onkologie-Studien haben. Um eine sinnvolle Wirkung zu erzielen, ist die Annahme und konsequente Umsetzung dieser Empfehlungen in allen Studien, Sponsoren, CROs und Standorten von entscheidender Bedeutung.

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