Reinigung, biochemische und biophysikalische Charakterisierung einer sauren α-Galactosidase aus den Samen von Annona squamosa (Puddingapfel)

 

Alpha-Galactosidase ist eine Exoglycosidase, die α-D-Galactose spaltet und zahlreiche Anwendungen in der Medizin-, Biotechnologie-, Lebensmittel- und Pharmaindustrie hat. In dieser Studie wurde eine niedermolekulare saure α-Galactosidase aus den Samen von Puddingapfel identifiziert. Die Reinigung von α-Galactosidase aus dem Rohextrakt entfetteter Samen wurde unter Verwendung von Ammoniumsulfatfraktionierung, hydrophober Wechselwirkung und Gelfiltrationschromatographietechniken erreicht. Die gereinigte Puddingapfel-α-Galactosidase (CaG) wanderte als einzelne Bande in nativer PAGE entsprechend einem Molekulargewicht von ~ 67 kDa und gespaltenen chromogenen, fluorogenen und natürlichen Substraten.

Es wurde gefunden, dass CaG ein Heterodimer mit Untereinheitenmassen von 40 und 30 kDa ist. Die kinetischen Parameter wie KM und Vmax betrugen mit p-Nitrophenyl-α-D-galactopyranosid 0,67 mM bzw. 1,5 U / mg. Galactose, Methyl-α-D-Galactopyranosid und D-Galacturonsäure hemmten die CaG-Aktivität im gemischten Modus. Die CD-Spektralanalyse im fernen UV-Bereich zeigte, dass gereinigtes CaG in seiner Sekundärstruktur überwiegend als Helix (35%), Beta-Faltblätter (16,3%) und Zufallsspulen (32,3%) vorliegt. Diese biochemischen und biophysikalischen Eigenschaften von CaG führen zum Verständnis seiner Primärsequenz und seiner Glykanstrukturen, die schließlich seine neuartigen physiologischen Rollen in Pflanzen und potenziellen industriellen Anwendungen definieren werden.

In diesem Artikel wird der Einfluss von Faktoren auf die Produktinnovation untersucht, die auf der Transformation und Nutzung von Wissen aus den organisationsinternen Beziehungen eines Unternehmens beruhen. Insbesondere analysiert dieses Papier den Einfluss des intraorganisatorischen Sozialkapitals (SC) (d. H. Bestehend aus strukturellen, relationalen und kognitiven Dimensionen) auf die realisierte Absorptionskapazität (RACAP). Darüber hinaus wird die Vermittlerrolle von RACAP in Bezug auf die Beziehung zwischen internem SC und Produktinnovation analysiert. Basierend auf einer Stichprobe von Unternehmen aus der spanischen biotechnologischen und pharmazeutischen Industrie wurden zwei Hypothesen unter Verwendung eines Strukturgleichungsmodells und der PLS-Technik (Partial Least Squares) getestet.

Die Ergebnisse stützen beide Hypothesen, was darauf hindeutet, dass die Entwicklung starker und enger Verbindungen, die auf einem gemeinsamen Verständnis und Vertrauen der Unternehmensmitglieder beruhen, das Unternehmen dazu veranlasst, dynamische Fähigkeiten zur Transformation und Nutzung von extern erworbenem Wissen zu entwickeln, was Innovationen auf der Grundlage der Entwicklung neuer Produkte fördert. Forschungsgrenzen, Implikationen und zukünftige Forschung werden auch von den Autoren des Papiers diskutiert.

 

Intensive Bitterkeit von Molekülen: Maschinelles Lernen zur Beschleunigung der Wirkstoffentdeckung

Die Arzneimittelentwicklung ist ein langer, teurer und mehrstufiger Prozess, der darauf abzielt, sichere Arzneimittel mit hoher Wirksamkeit zu erzielen. Eine entscheidende Voraussetzung für den Abschluss des Medikationsschemas für orale Medikamente, insbesondere für pädiatrische und geriatrische Bevölkerungsgruppen, ist das Erreichen eines Geschmacks, der die Compliance nicht behindert. Derzeit wird der aversive Geschmack von Arzneimitteln in späten Stadien klinischer Studien getestet. Dies kann zu einer Neuformulierung führen, die möglicherweise dazu führt, dass mehr Tiere für zusätzliche Toxizitätsversuche verwendet werden, die finanziellen Kosten steigen und die Markteinführung verzögert wird.

Hier präsentieren wir BitterIntense, ein Werkzeug für maschinelles Lernen, das Moleküle aufgrund ihrer chemischen Struktur in “sehr bitter” oder “nicht sehr bitter” klassifiziert. Das Modell, das auf chemisch verschiedenen Verbindungen trainiert wurde, weist bei mehreren Testsätzen eine Genauigkeit von über 80% auf. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass etwa 25% der Arzneimittel als sehr bitter vorhergesagt werden, wobei die Prävalenz (~ 40%) bei COVID19-Arzneimittelkandidaten und bei mikrobiellen Naturstoffen noch höher ist. Es wird vorausgesagt, dass nur ~ 10% der toxischen Moleküle stark bitter sind, und es wird auch vermutet, dass intensive Bitterkeit nicht mit der Hepatotoxizität von Arzneimitteln korreliert.

Sehr bittere Verbindungen können jedoch kardiotoxischer sein als nicht sehr bittere Verbindungen, die signifikant niedrigere QPlogHERG-Werte besitzen. BitterIntense ermöglicht eine schnelle und einfache Vorhersage der starken Bitterkeit von Verbindungen, die für die Lebensmittel-, Pharma- und Biotechnologieindustrie von Interesse sind. Wir schätzen, dass die Implementierung von BitterIntense oder ähnlichen Tools zu Beginn des Arzneimittelentdeckungsprozesses zu einer Verringerung der Verzögerungen, des Tiergebrauchs und der finanziellen Gesamtbelastung führen kann.

Empfehlungen zur Straffung und Standardisierung der Machbarkeitsbewertungen für Standorte für klinische Studien: Eine ASCO-Forschungserklärung

Machbarkeitsbewertungen (FAs) sind wichtig, um die Standortfähigkeiten für die Durchführung klinischer Studien und ihre Eignung für bestimmte Studien zu ermitteln. Derzeitige FA-Methoden, die von Sponsoren von Biotechnologie- und Pharmaversuchen (Biotech-Pharma) und Auftragsforschungsorganisationen (CROs) verwendet werden, sind jedoch kostspielig, ineffizient, unnötig belastend und ressourcenintensiv. Diese Methoden verzögern den Start der Studie, wirken als Hindernis für die Teilnahme am Standort und verringern letztendlich den rechtzeitigen Zugang der Patienten zu klinischen Studien und neuartigen Behandlungen.
Methoden: Eine ASCO-Task Force wurde einberufen, um die spezifischen Belastungen und Herausforderungen der FA zu bewerten und Empfehlungen zur Verbesserung ihrer Effizienz und Effektivität zu entwickeln. Stakeholder (einschließlich Versuchsstandorte, Biotech-Pharma-Sponsoren und CROs) gaben Einblicke in Herausforderungen und boten Lösungen durch zwei Umfragen und ein persönliches Treffen an.

Die Task Force nutzte das Feedback, um Konsensempfehlungen zur Verbesserung der FAs für klinische Studien in der Onkologie zu formulieren.
Ergebnisse: Drei wichtige Empfehlungen wurden für die Anwendung in allen von Biotech-Pharma gesponserten Studien ermittelt: (1) Implementierung eines optimierten und einheitlichen FA-Prozesses in allen Studien und Sponsoren; (2) Fragen minimieren und standardisieren; und (3) Nutzung von Technologie zur Zentralisierung von FAs, Erleichterung der Kommunikation und Reduzierung von Redundanzen.
Schlussfolgerung: Es ist dringend erforderlich, den derzeitigen FA-Prozess zu verbessern, der kostspielig, inkonsistent, ineffizient, arbeitsintensiv und von ungewisser Wirksamkeit ist.

 

Vornado™ miniature vortex mixer with red cup head, 100 to 240V with European 2 prong ADAPTER*
BV101-R-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 224.6

MyBlock™ Mini Dry Bath, 100-240V (European 2 prong plug)
BSH200-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 309.1

MyFuge™ 12 Mini Centrifuge 100-240V (European 2 prong plug)
C1012-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 448.5

Incu-Mixer MP2™ Heated Plate Vortexer 115-240V European plug)
H6002-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 1992.7

European Pesticide Mix 2017-170 100 ug/mL (100 ppm) 1mLin Acetonitrile.
EU-2017-170	Scientific Laboratory Supplies	1ML	EUR 78

MyBlock™ Mini dry bath with cooling, 100-240V (European 2 prong Plug)
BSH300-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 817.6

MyBlock™ HL Mini Dry Bath with Heated Lid, 100-240V (European 2 prong plug)
BSH200-HL-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 507.3

Orbi-Shaker™ Jr with rubber mat platform (9.5"x8"), 100-240V (European 2 prong plug)
BT302-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 1182.1

MyFuge™ Mini Centrifuge, blue lid, with 2 rotors, 100-240V (European 2 prong plug)
C1008-B-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 346.9

MyFuge™ Mini Centrifuge, clear lid, with 2 rotors, 100-240V (European 2 prong plug)
C1008-C-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 346.9

MyFuge™ Mini Centrifuge, green lid, with 2 rotors, 100-240V (European 2 prong plug)
C1008-G-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 346.9

EP Reagent Ruthenium Red Sol.
1075201	Scientific Laboratory Supplies	100ML	EUR 129.6

BenchWaver™ 3D Rocker with flat mat, 13.5x13" platform, 100-240V (European 2 prong plug)
B3D5000-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 1518.6

Vornado™ miniature vortexer, grey cup head, 100 to 240V with European 2 prong PLUG*
BV101-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 224.6

MyFuge™ Mini Centrifuge, purple lid, with 2 rotors, 100-240V (European 2 prong plug)
C1008-P-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 346.9

EP Reagent Phenol Red Sol. R2
1063603	Scientific Laboratory Supplies	500ML	EUR 99.6

Congo Red
2588-100	Biovision	each	EUR 144

Congo Red
2588-500	Biovision	each	EUR 352.8

Congo Red
B7766-50	ApexBio	50 mg	EUR 154.8

Congo red
CB0324	Bio Basic	50g	EUR 79.84

Congo Red
HY-D0236	MedChemExpress	500mg	EUR 159.6

Orbi-Shaker™ MP with 4 position micro plate platform, 100-240V (European 2 prong plug)
BT1502-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 1145.9

EP Reagent Methyl Red Mixed Sol.
1055101	Scientific Laboratory Supplies	100ML	EUR 52.8

Vornado™ miniature vortex mixer with blue cup head, 100 to 240V with European 2 prong ADAPTER*
BV101-B-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 224.6

Vornado™ miniature vortex mixer with green cup head, 100 to 240V with European 2 prong ADAPTER*
BV101-G-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 224.6

Vornado™ miniature vortex mixer with purple cup head, 100 to 240V with European 2 prong ADAPTER*
BV101-P-E	Benchmark Scientific	1 PC	EUR 224.6

EP Reagent Indicator Sol. Methyl Red 0.02%
1055102	Scientific Laboratory Supplies	100ML	EUR 52.8

CP Reagent Coloration Primary Solution Red
CPPR01	Scientific Laboratory Supplies	100ML	EUR 206.4

Congo Red Powder
abx090680-5g	Abbexa	5 g	EUR 226.8

Congo Red Solution
CRA030	ScyTek Laboratories	30 ml	EUR 88.8

Congo Red Solution
CRA500	ScyTek Laboratories	500 ml	EUR 127.2

Congo Red Solution
CRA999	ScyTek Laboratories	1000 ml	EUR 171.6

Congo Red (C.I. 22120)
GT5674-100G	Glentham Life Sciences	100 g	EUR 74.4

Congo Red (C.I. 22120)
GT5674-250G	Glentham Life Sciences	250 g	EUR 103.2

Congo Red (C.I. 22120)
GT5674-25G	Glentham Life Sciences	25 g	EUR 54

Congo Red (C.I. 22120)
GT5674-100	Glentham Life Sciences	100	EUR 31.7

Congo Red (C.I. 22120)
GT5674-25	Glentham Life Sciences	25	EUR 16.4

Congo Red (C.I. 22120)
GT5674-250	Glentham Life Sciences	250	EUR 55.4

EP Reagent Biuret Reagent
1011601	Scientific Laboratory Supplies	1L	EUR 52.8

EP Reagent Iodoplatinate Reagent
1046300	Scientific Laboratory Supplies	200ML	EUR 446.4

EP Reagent Molybdovanadic Reagent
1056700	Scientific Laboratory Supplies	100ML	EUR 52.8

EP Reagent Methoxyphenylacetic Reagent
1053601	Scientific Laboratory Supplies	100ML	EUR 435.6

Congo Red Indicator 0.1%
COR01001	Scientific Laboratory Supplies	1L	EUR 301.59

Congo Red Indicator 0.1%
COR01005	Scientific Laboratory Supplies	500ML	EUR 90.09

Congo Red Indicator 1%
COR1005	Scientific Laboratory Supplies	500ML	EUR 110.98

Congo Red Indicator 0.1%
COR105	Scientific Laboratory Supplies	500ML	EUR 90.09

EP Reagent Sulfomolybdic Reagent R3
1086500	Scientific Laboratory Supplies	1L	EUR 354

EP Reagent Phosphomolybdotungstic Reagent
1065000	Scientific Laboratory Supplies	100ML	EUR 201.6

EP Reagent Bromocresol Green Methyl Red Mixed Indicator
1012602	Scientific Laboratory Supplies	100ML	EUR 52.8

EP Reagent Bromocresol Green - Methyl Red Mixed Indicator
10126021	Scientific Laboratory Supplies	1L	EUR 263.73

EP Reagent Bromocresol Green - Methyl Red Mixed Indicator
10126025	Scientific Laboratory Supplies	5L	EUR 406.8

USP Sol. Congo Red TS
USP1901	Scientific Laboratory Supplies	100ML	EUR 71.81

USP Sol. Congo Red TS
USP1905	Scientific Laboratory Supplies	500ML	EUR 118.81

FD Congo Red Solution™
PS108	FD Neurotechnologies	500 ml	EUR 284.4

Amyloid Stain Kit (Congo Red)
AMY-1	ScyTek Laboratories	1 kit(s)	EUR 198

Amyloid Stain Kit (Congo Red)
AMY-2	ScyTek Laboratories	1 kit(s)	EUR 130.8

Congo Red "high purity grade"
80028	Biotium	100MG	EUR 206.4
Description: Minimum order quantity: 1 unit of 100MG

MTS Reagent
2808-1000	Biovision	each	EUR 1188

MTS Reagent
2808-250	Biovision	each	EUR 438

MTT Reagent
2809-1G	Biovision	each	EUR 216

MTT Reagent
2809-5G	Biovision	each	EUR 652.8

BOP reagent
5-02141	CHI Scientific	25g	Ask for price

BOP reagent
5-02142	CHI Scientific	100g	Ask for price

BOP reagent
A7015-100000	ApexBio	100 g	EUR 240
Description: A peptide coupling reagent. Can be used in the preparation of phenyl esters of amino acids which have been shown to be valuable as blocked derivatives of amino acids in the field of peptide synthesis.

BOP reagent
A7015-25000	ApexBio	25 g	EUR 135.6
Description: A peptide coupling reagent. Can be used in the preparation of phenyl esters of amino acids which have been shown to be valuable as blocked derivatives of amino acids in the field of peptide synthesis.

Traut's Reagent
2330-1000	Biovision	each	EUR 418.8

Traut's Reagent
2330-500	Biovision	each	EUR 248.4

VeZol Reagent
R411-01	Vazyme	100 ml	EUR 76.4

VeZol Reagent
R411-02	Vazyme	200 ml	EUR 127.6

Bluing Reagent
BRT030	ScyTek Laboratories	30 ml	EUR 72

Bluing Reagent
BRT125	ScyTek Laboratories	125 ml	EUR 75.6

Bluing Reagent
BRT3800	ScyTek Laboratories	1 Gal.	EUR 220.8

Bluing Reagent
BRT500	ScyTek Laboratories	500 ml	EUR 91.2

Bluing Reagent
BRT999	ScyTek Laboratories	1000 ml	EUR 105.6

Chymase reagent
30C-CP1129	Fitzgerald	5 units	EUR 2622
Description: Purified native Human Chymase reagent

BURGESS REAGENT
702010	Survival Technologies	each	Ask for price

Nessler Reagent
NESSR	Scientific Laboratory Supplies	500ML	EUR 182.4

FreeZol Reagent
R711-01	Vazyme	100 ml	EUR 71.2

FreeZol Reagent
R711-02	Vazyme	200 ml	EUR 127.2

Chromium Reagent
1206699	Scientific Laboratory Supplies	EACH	EUR 157.2

Bradford reagent
BDE641	Bio Basic	100ml	EUR 73.21

Beaucage reagent
HY-100951	MedChemExpress	10mM/1mL	EUR 151.2

Bradford Reagent
GT1202-1	Glentham Life Sciences	1	EUR 165.7

Bradford Reagent
GT1202-500	Glentham Life Sciences	500	EUR 105.5

Cod Reagent 0-15000Ppm
24159-51	Scientific Laboratory Supplies	PK25	EUR 116.4

Phosphate Reagent
106199	Scientific Laboratory Supplies	PK100	EUR 69.6

Ninhydrin Reagent
MIC6746	Scientific Laboratory Supplies	EACH	EUR 31.12

Detection Reagent Concentrate, 1ML
X041-1ML	Arbor Assays	1ML	EUR 109

COD Reagent (1977 method)
WTR50W	Scientific Laboratory Supplies	2.5L	EUR 135.6

Convoy? Transfection Reagent
1110-1ml	ACTGene	each	EUR 409.2

ECL Start Reagent 2000cm2
RPN3243	Scientific Laboratory Supplies	EACH	EUR 138

ECL Start Reagent 4000cm2
RPN3244	Scientific Laboratory Supplies	EACH	EUR 222

DTPA Extraction Reagent Concentrate
DTPAE01	Scientific Laboratory Supplies	1L	EUR 434.4

BCA Reagent, 16ML
C144-16ML	Arbor Assays	16ML	EUR 132

TDA Reagent - 10mL
MIC6732	Scientific Laboratory Supplies	EACH	EUR 26.33

PYR Reagent - 10mL
MIC6744	Scientific Laboratory Supplies	EACH	EUR 31.12

Thioacetamide Reagent
THIOR01	Scientific Laboratory Supplies	100ML	EUR 99.6

Olsens Extraction Reagent Concentrate
OLSER01	Scientific Laboratory Supplies	1L	EUR 91.2

Girard's reagent T
20-abx184099	Abbexa	EUR 243.60 EUR 376.80	100 g 500 g

Silica 3 Reagent
27169	Scientific Laboratory Supplies	100ML	EUR 99.6

BSA (Reagent Grade)
30-AB79	Fitzgerald	1 kg	EUR 1862.4
Description: Reagent Grade Bovine Serum Albumin (99% pure)

BSA (Reagent Grade)
30-AB81	Fitzgerald	200 grams	EUR 571.2
Description: Reagent Grade Sulphydryl Blocked BSA (99% pure)

Tri-RNA Reagent
FATRR-001	Favorgen	100ml	EUR 283.2

Tri-RNA Reagent
FATRR-002	Favorgen	50ml	EUR 211.2

Tri-RNA Reagent
FATRR-003	Favorgen	450ml	EUR 774

Schiff''s reagent
GT3929-1	Glentham Life Sciences	1	EUR 113.1

Schiff''s reagent
GT3929-250	Glentham Life Sciences	250	EUR 37.7

ECL Start Reagent 200cm2
RPN3245	Scientific Laboratory Supplies	EACH	EUR 26.4

EP Reagent Ferroin
1038100	Scientific Laboratory Supplies	100ML	EUR 96

Griess Reagent Kit
30100	Biotium	1KIT	EUR 178.8
Description: Minimum order quantity: 1 unit of 1KIT

Biotin reagent (HRP)
65C-CE0202	Fitzgerald	5 mg	EUR 292.8
Description: HRP conjugated biotin labelling reagent

Alcohol, Reagent (70%)
EAS500	ScyTek Laboratories	500 ml	EUR 94.8

Alcohol, Reagent (70%)
EAS999	ScyTek Laboratories	1000 ml	EUR 121.2

SulfaVer 4 Reagent
2106769	Scientific Laboratory Supplies	PK100	EUR 78

Citric Acid Reagent
2254232	Scientific Laboratory Supplies	EACH	EUR 52.8

DTT (Cleland's reagent)
DB0058	Bio Basic	5g	EUR 101.76

DTNB (Ellman's Reagent)
DB0113	Bio Basic	5g	EUR 117.42

n-Heptane Reagent
HC5400	Bio Basic	1L	EUR 94.8

Bottle Reagent 500ml Pyrex
B54564	Scientific Laboratory Supplies	PK10	EUR 124.8

Bradford Dye Reagent
0209R	AthenaES	100 ml	EUR 157.2

DeStreak reagent 1mL
17600318	Scientific Laboratory Supplies	EACH	EUR 82.8

FcR blocking Reagent
20-abx290024	Abbexa	EUR 452.40 EUR 619.20	200 tests 400 tests

Detection Reagent A
abx296004-120ul	Abbexa	120 ul	EUR 385.2

Alle Beteiligten können von der Umsetzung dieser Empfehlungen profitieren, die darauf abzielen, die Belastungen zu minimieren und sicherzustellen, dass mehr Studienorte und Patienten rechtzeitig Zugang zu klinischen Onkologie-Studien haben. Um eine sinnvolle Wirkung zu erzielen, ist die Annahme und konsequente Umsetzung dieser Empfehlungen in allen Studien, Sponsoren, CROs und Standorten von entscheidender Bedeutung.